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食品中菌落總數和大腸菌群的檢測ppt課件下載

素材編號:
419003
素材軟件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上傳:
yangyiner
上傳時間:
2020-07-04
素材大小:
2 MB
素材類別:
生物課件PPT
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食品中菌落總數和大腸菌群的檢測ppt課件

食品中菌落總數和大腸菌群的檢測ppt課件免費下載是由PPT寶藏(www.ichenwin.com)會員yangyiner上傳推薦的生物課件PPT, 更新時間為2020-07-04,素材編號419003。

這是食品中菌落總數和大腸菌群的檢測ppt課件,包括了菌落總數測定法,大腸菌群的檢測,食品衛生標準中的微生物指標概論,菌落總數測定法,食品微生物學檢驗大腸菌群計數等內容,歡迎點擊下載。


另一種是將食品經過適當處理(溶解和稀釋)后,在顯微鏡下對細菌細胞數進行直接計數,這樣計數的結果,既包括活菌,也包括尚未被分解的死菌體,因此稱為細菌總數。
      目前我國食品衛生標準中規定的細菌總數實際上是指菌落總數。即指的是在平板計數培養基上長出的菌落數。
另一方面,它可以用來預測食品可能存放的期限程度。如實驗表明,菌數為105cfu/cm2的魚,在0℃下可保持6d,而菌數為103cfu/cm2時,保存期可達12d。
       但上述規則也有例外,有些食品成品的菌落總數并不高,但由于已有細菌繁殖并已產生了毒素,且毒素性狀穩定,仍存留于食品中;再有一些食品如酸泡菜和酸乳等,本身就是通過微生物的作用而制成的,且是活菌制品。
因此,菌落總數的測定對評價食品的新鮮度和衛生質量有著一定的衛生指標的作用,但本能單憑此一項指標來判定食品的衛生質量,還必須配合大腸菌群和致病菌等檢驗,才能作出比較全面、準確的評價。
GB/T 4789.2-2010
本標準與GB/T 4789.2-2008相比主要修改如下:
——修改了標準的中英文名稱;(食品安全國家標準
食品微生物學檢驗 菌落總數測定/食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定)
——修改了菌落總數計算公式中的解釋;
——修改了培養基和試劑;
——刪除了第二法 菌落總數PetrifilmTM 測試片法。 (——培養基由營養瓊脂改為平板計數瓊脂; ——菌落總數計算公式進行了修改; ——增加了第二法“菌落總數PetrifilmTM測試片法”;)-2008
3.設備和材料
    3.1 恒溫培養箱:36℃±1℃  30℃±1℃。 3.2 冰箱:2℃~5℃。 3.3 恒溫水浴箱:46℃±1℃。 3.4 天平:感量0.1g。 3.5  均質器 3.6  振蕩器 3.7 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及其吸頭。 3.8 無菌錐形瓶:容量為250mL、500mL。 3.9 無菌培養皿:直徑為90mm。 3.10 pH計或pH比色管或精密pH試紙。 3.11 放大鏡或/和菌落計數器或PetrifilmTM自動判讀儀。 3.12 無菌刀、剪子、鑷子等。
4 培養基和試劑
4.1 平板計數瓊脂培養基 (Plate count agar PCA),見附錄A中A.1。 pH =7.0±0.2 4.2 磷酸鹽緩沖稀釋液,見附錄A中A.2。 pH =7.2
4.3  無菌生理鹽水,見附錄A中A.3 :稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min。
(4.4   1 mol/L 氫氧化鈉(NaOH):稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL水中。
  4.5  1 mol/L 鹽酸(HCl):移取濃鹽酸90mL,用蒸餾水稀釋至1000mL
  4.6  PetrifilmTM菌落總數測試片(aerobic count plate)和壓板。)
  4.7  75%乙醇。
6、操作步驟
6.1.1 固體和半固體食品:以無菌操作稱取25g樣品,放入于裝有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或0.85%生理鹽水的無菌均質杯內,于8000r/min~10000 r/min均質1min~2min,制成1:10樣品勻液;或放入于225 mL稀釋液的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1min~2min制成1:10的樣品勻液。 6.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液(表面取樣的樣品按一定的比例制成1:1樣品勻液和/或1:10樣品勻液。)。
6.1.3 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1.0 mL,沿管壁緩慢注于裝有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀釋液),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。 6.1.4 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭,按上述操作順序,做10倍遞增樣品勻液,如此每遞增稀釋一次,即換用1次1mL滅菌吸管或吸頭。 6.1.5 根據對樣品污染情況的估計,選擇2~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),分別在做10倍遞增稀釋的同時,吸取1.0 mL樣品勻液于無菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿。同時分別取1mL稀釋液加入兩個無菌平皿作空白對照。 6.1.6 樣品勻液移入平皿后,應及時將涼至46℃平板計數瓊脂培養基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)注入平皿約15mL~20mL,并轉動平皿使混合均勻。同時將平板計數瓊脂培養基傾入加有1.0 mL空白稀釋液的無菌平皿內作對照。
6.2 培養
6.2.1 瓊脂凝固后,將平板翻轉,36℃±1℃培養箱內培養48h±2h。水產品采用30℃±1℃培養72h±3h(08新增)。
6.2.2 瓊脂凝固后,如果懷疑樣品中含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時,可在表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4mL),并在報告上記錄該操作,待覆蓋層凝固,翻轉平板,按6.2.1條件進行操作
6.3 菌落計數
      可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄相應的菌落數量和稀釋倍數。菌落計數以菌落形成單位(colony forming units,CFU)表示。 6.3.1 平板菌落數的選擇        選取菌落數在30CFU~300CFU個之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30CFU個菌落的平板記錄具體菌落數,大于300的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板平均數。
6.3.2      其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘2,代表全平板菌落數。
6.3.3      當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,即將每條鏈作為一個菌落計數。如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線),若僅有一條鏈,可視為一個菌落;如果有不同來源的幾條鏈,則應將每條鏈作為一個菌落計。
1.若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每克(毫升)中菌落總數結果。 (見表例1)。
    2.若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內(30~300個菌落)時,按如下公式計算:
                 N= ∑C/(n1 +0.1n2)d
式中:
    N — 樣品中菌落數;
   ∑C  — 平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;
    n1  — 第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;
    n2  — 適宜范圍菌落數的第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;
     d  — 稀釋因子(第一稀釋度);
示例:
    稀釋度    1:100(第一稀釋度) 1:1000(第二稀釋度)
    菌落數          232,244                           33,35
    N= ∑C/(n1 +0.1n2)d=(232+244+33+35)/(2+0.1×2) ×10-2 =544/0.022=24727
上述數據經“四舍五入”后,表示為25000 或 2.5×104。
3. 若所有平均菌落數均大于300,則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表例4)。
7.2、菌落計數的報告:
7.2.1 菌落數在100以內時,按“四舍五入”方式修約,采用兩位有效數字報告。 7.2.2 大于或等于100時,前第3位數字采用“四舍五入”方式修約后,取前2位數字,后面用0代替位數來表示結果;也可用10的指數形式來表示,此時也按“四舍五入”方式修約,采用兩位有效數字。 7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延。 7.2.4 若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。 7.2.5 稱重取樣以CFU/g為單位報告,按體積取樣的以CFU/mL為單位報告(表面取樣以CFU/cm2報告)。
其中包括大腸桿菌、產氣桿菌和一些中間類型的細菌,這群細菌能在含有膽鹽的培養基上生長。實際上包括埃希氏菌屬、檸檬酸細菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬等,其中以埃希氏菌屬為主,稱為典型大腸桿菌,其它三屬稱為非典型大腸桿菌。
GB/T5009.3-2010 食品安全國家標準食品微         生物學檢驗 大腸菌群計數
               二、 細 菌 學 檢 驗 程序----大腸菌群
GB 4789.3-2003
3.設備和材料
4.培養基和試劑
6 操作步驟
6.1.3 樣品勻液的pH 值應在6.5~7.5 之間,必要時分別用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 調節。
6.1.4 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL,沿管壁緩緩注入9 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1 支1 mL 無菌吸管反復吹打,使其混合均勻,制成1:100 的樣品勻液。
6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計,按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1 次,換用1 支1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過15 min。
6.2 初發酵試驗
每個樣品,選擇3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯/乳糖膽鹽發酵管,每管接種1mL(如接種量超過1 mL,則用雙料LST肉湯),36℃±1 ℃培養24 h±2 h,觀察倒管內是否有氣泡產生,24 h±2 h產氣者進行復發酵試驗,如未產氣則繼續培養至48 h±2 h,產氣者進行復發酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。
2003版增加-分離培養:伊紅美藍瓊脂平板(36℃±1 ℃, 24 h±2 h)
操作示意圖
6.3 復發酵試驗
          用接種環從產氣的LST肉湯管中分別取培養物1環,移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)管/乳糖發酵管中,36 ℃±1℃培養48 h±2 h,觀察產氣情況。產氣者,計為大腸菌群陽性管。
6.4 大腸菌群最可能數(MPN)的報告
按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數,檢索MPN表(見附錄B),報告每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值。
8.1 樣品的稀釋
按6.1進行。
8.2 平板計數
8.2.1 選取2個~3個適宜的連續稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。
8.2.2 及時將15 mL~20 mL冷至46 ℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)約傾注于每個平皿中。小心旋轉平皿,將培養基與樣液充分混勻,待瓊脂凝固后,再加3 mL~4 mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉平板,置于36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h。
8.3 平板菌落數的選擇
選取菌落數在15 CFU~150 CFU 之間的平板,分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。
典型菌落為紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環,菌落直徑為0.5 mm 或更大。
8.4 證實試驗
從VRBA 平板上挑取10 個不同類型的典型和可疑菌落,分別移種于BGLB 肉湯管內,36 ℃±1 ℃培養24 h~48 h,觀察產氣情況。凡BGLB 肉湯管產氣,即可報告為大腸菌群陽性。
8.5 大腸菌群平板計數的報告
         經最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計數的平板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每g(mL)樣品中大腸菌群數。例:10-4 樣品稀釋液1 mL,在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為:100×6/10×104/g(mL)=6.0×105CFU/g(mL)。
8.6 培養基和試劑
A.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯
A.1.1 成分
胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g
氯化鈉 5.0 g
乳糖 5.0 g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2.75 g
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 2.75 g
月桂基硫酸鈉 0.1 g
蒸餾水 1 000 mL
pH 6.8±0.2
A.1.2 制法
將上述成分溶解于蒸餾水中,調節 pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10 mL。121 ℃高壓
滅菌15 min。
A.2 煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯
A.2.1 成分
蛋白胨 10.0 g
乳糖 10.0 g
牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液 200 mL
0.1%煌綠水溶液 13.3 mL
蒸餾水 800 mL
pH 7.2±0.1
A.2.2 制法
將蛋白胨、乳糖溶于約500 mL蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200 mL(將20.0 g脫水牛膽粉溶于200 mL
蒸餾水中,調節pH至7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975 mL,調節pH,再加入0.1%煌綠水溶液13.3 mL,
用蒸餾水補足到1 000 mL,用棉花過濾后,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10 mL。121 ℃高壓滅
菌15 min。
A.3 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
A.3.1 成分
蛋白胨                  7.0 g
酵母膏                  3.0 g
乳糖                      10.0 g
氯化鈉                  5.0 g
膽鹽或3號膽鹽         1.5 g
中性紅                    0.03 g
結晶紫                    0.002 g
瓊脂                       15 g~18 g
蒸餾水                  1 000 mL
pH 7.4±0.1
A.3.2 制法
將上述成分溶于蒸餾水中,靜置幾分鐘,充分攪拌,調節pH。煮沸2 min,將培養基冷卻至45 ℃~50 ℃傾注平板。使用前臨時制備,不得超過3 h。
A.5 無菌生理鹽水
A.5.1 成分
氯化鈉 8.5 g
蒸餾水 1 000 mL
A.5.2 制法
稱取8.5g氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中,121 ℃高壓滅菌15 min。
A.6   1 mol/L NaOH
A.6.1 成分
NaOH 40.0 g
蒸餾水 1000 mL
A.6.2 制法
稱取40 g氫氧化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中,121 ℃高壓滅菌15 min。
A.7   1 mol/L HCl
A.7.1 成分
HCl 90 mL
蒸餾水 1 000 mL
A.7.2 制法
移取濃鹽酸90 mL,用蒸餾水稀釋至1 000 mL,121 ℃高壓滅菌15 min。
GB/T 4789.3-2003
結果報告
 

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