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DNA的測序方法、原理及其應用ppt課件下載

素材編號:
419005
素材軟件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上傳:
yangyiner
上傳時間:
2020-07-04
素材大小:
1 MB
素材類別:
生物課件PPT
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DNA的測序方法、原理及其應用ppt課件

DNA的測序方法、原理及其應用ppt課件免費下載是由PPT寶藏(www.ichenwin.com)會員yangyiner上傳推薦的生物課件PPT, 更新時間為2020-07-04,素材編號419005。

這是DNA的測序方法、原理及其應用ppt課件,包括了DNA序列測定概述及其發展,測序的常用方法,堿基特異性修飾及裂解,3種方法的比較,DNA序列測定的應用等內容,歡迎點擊下載。

DNA的測序方法、原理及其應用
一、DNA序列測定概述及其發展
1963年,Sanger和Thompson等人第一次完成胰島素51個
氨基酸的序列測定,這在當時來說是一件了不起的大事。70
年代后期,Sanger和Maxam----Gilbert等人又建立了核酸序
列測定的方法,Sanger雙脫氧末端終止法和Maxam----
Gilbert化學裂解法將核酸序列測定技術推進到“直讀”階段,
使核酸序列測定變得遠比蛋白質氨基酸序列測定容易,這樣
人們可以通過核酸序列和遺傳密碼推導出蛋白質氨基酸的序
列。
二、測序的常用方法
1)雙脫氧鏈終止法測序(the chain termination method)
基本原理:
        通過合成與單鏈DNA互補的多核苷酸鏈,由于合成的互補鏈可在不同位置隨機終止反應,產生只差一個核苷酸的DNA分子,從而來讀取待測DNA分子的順序。
用于終止反應的雙脫氧核苷酸:
   將2’ ,3’ –雙脫氧核苷酸(ddNTP)參入到新合成的DNA鏈中,由于參入的ddNTP缺乏3’ –羥基,因此不能與下一位核苷酸反應形成磷酸二酯鍵,DNA合成反應將中止。
2)Maxam-Gilbert 化學降解法測序
基本原理:
① 用放射性核素標記待測DNA一側末端
   ②  將標記DNA分為G、A+G、C+T、C 4個反應體系
   ③  用不同的化學試劑處理不同反應體系,隨機斷裂DNA片段某種堿基中的任何一個,產生一組一端為放射線標記的末端,另一端為不同大小的DNA片段的混合物
   ④  電泳分離,放射自顯影得到互相錯落的梯形圖譜,即可讀出DNA序列
3)  DNA自動化測序
特點
原理同末端終止法
標記物為熒光染料
激光掃描自動測序
結果清晰、準確、分辨率高
測序速度快  200bp/h
Maxam-Gilbert法只需簡單化學試劑。所測序列來自原DNA分子而不是酶促合成反應所產生的拷貝,因此利用化學法可以對合成的寡核苷酸進行測序,可以分析諸如甲基化等DNA修飾的情況。但所能測定的長度要比Sanger法短一些,它對放射性標記末端 250個核苷酸以內的DNA序列效果最佳。
Sanger 法雖需要單鏈模板和特異寡核苷酸,并需獲得大腸桿菌DNA 聚合酶IKlenow 片段的高質量酶制劑,而隨著M13 噬菌體和噬菌粒載體的發展,也由于現成的合成引物容易獲得及測序反應日期完善,雙脫氧鏈終止法如今遠比Maxam-Gilbert法應用得廣泛。
由于Sanger法既簡便又快速,目前大多數測序策略都是為Sanger法而設計的。
  DNA自動測序與手工測序的不同點
1)標記物不同:手工測序采用放射性核素標記,而自動測序采用4種熒光染料分別標記ddNTP或標記引物
2)  加樣方式不同:手工測序,一個樣品的4個測序反應物分別在不同泳道進行,而自動測序可在一個泳道內電泳
3)  檢測手段不同:手工測序采用放射自顯影,從4種寡聚核苷酸的梯子形圖譜中讀出DNA序列,而自動測序則采用激光掃描器同步掃描,計算機進行閱讀和編輯
2、核苷酸序列的生物信息分析
一、在線分析的核心網站
http://www.ncbi.nlm.nih.gov
http://bip.weizmann.ac.il
http://au.expasy.org/tools/#primary
http://www.ebi.ac.uk/embl/
http://www.ddbj.nig.ac.jp/
二、本地分析的重要軟件
Vector NTI Suite 6.0及以上的版本:綜合分析、載體分析。
DNA Star:綜合分析
Primer Premier 5.0:引物設計
Oligo 7:寡核苷酸分析,引物計算
GCG:蛋白質、核酸序列
1) Genbank序列檢索
氨基酸序列同源性分析
堿基序列同源性
分子進化樹分析親緣性關系
2)  蛋白序列序列創建分子分析
 

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