您的位置:首頁 > PPT課件 > 生物課件PPT > 環介導等溫擴增技術原理ppt課件

環介導等溫擴增技術原理ppt課件下載

素材編號:
419009
素材軟件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上傳:
yangyiner
上傳時間:
2020-07-04
素材大小:
4 MB
素材類別:
生物課件PPT
網友評分:

素材預覽

環介導等溫擴增技術原理ppt課件

環介導等溫擴增技術原理ppt課件免費下載是由PPT寶藏(www.ichenwin.com)會員yangyiner上傳推薦的生物課件PPT, 更新時間為2020-07-04,素材編號419009。

這是環介導等溫擴增技術原理ppt課件,包括了等溫擴增技術簡介,等溫擴增技術的應用前景,幾種等溫擴增技術比較,環介導的等溫擴增技術原理,環介導的等溫擴增演示,環介導的等溫擴增檢測等內容,歡迎點擊下載。


Principle of Loop-mediated isothermal amplification
煙雨莫問
主要內容
等溫擴增技術簡介
等溫擴增技術的應用前景
幾種等溫擴增技術比較
環介導的等溫擴增技術原理
環介導的等溫擴增演示
環介導的等溫擴增檢測
等溫擴增的概念
等溫擴增技術(Isothermal Amplification Technology)是核酸體外擴增技術,其反應過程始終維持在恒定的溫度下,通過添加不同活性的酶和各自特異性引物(或不加)來達到快速核酸擴增的目的。
與PCR技術相比核酸等溫擴增對儀器的要求大大簡化,反應時間大大縮短,更能滿足快速簡便的需求。
等溫擴增的優勢應用
特異性高
分析速度快
成本低
突變率低
不需要升溫降溫過程,一臺的加熱器即可操作
檢測核酸成分比檢測微生物本身危險性小
方便診斷
等溫擴增的種類
環介導核酸等溫擴增技術(LAMP)
滾環擴增技術 RCA
單引物等溫擴增 SPIA
依賴解旋酶的等溫擴增技術 HAD
鏈替代擴增 SDA
交叉引物擴增技術 CPA
核酸依賴性擴增檢測技術 NASBA
Qβ復制酶反應
各類等溫擴增技術的比較
環介導等溫擴增核酸技術優勢
LAMP克服了傳統PCR反應需要通過反復熱變性獲得單鏈模板的缺點,避免了反復升降溫的過程,實現了恒溫條件下的連續快速擴增,具有更高的靈敏度和擴增效率。
操作簡單:只需一個水浴鍋
快速高效:不需要預先的雙鏈DNA熱變性.避免了溫度循環而造成 的時間損失
特異性強:針對靶序列6個區域設計的4種特異性引物。6個區域中任何區域與引物不匹配均不能進行核酸擴增。故其特異性極高。 
高靈敏度,對于病毒擴增模板可達幾個拷貝,比PCR高出數量級的差異。
缺點:由于LAMP擴增是鏈置換合成,靶序列長度最好在300 bp以內。>500 bp則較難擴增。故不能進行長鏈DNA的擴增。靈敏度高易造成假陽性結果。
環介導等溫擴增核酸技術
環介導等溫擴增(Loop-mediated isothermal amplification ,簡稱LAMP)是利用4個特殊設計的引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶,在恒溫條件下特異、高效、快速地擴增DNA的新技術。
LAMP技術以其特異性強、靈敏度高、快速、準確和操作簡便等優點在核酸的科學研究、疾病的診斷和轉基因食品檢測等領域得到了日益廣泛的應用。
環介導等溫擴增原理
60—65℃是雙鏈DNA復性及延伸的中間溫度,DNA在65℃左右處于動態平衡狀態。利用引物合成的DNA鏈取代模板互補鏈。
①擴增目的片段時依賴的是一種具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶
②需四條能夠識別靶序列六個特異區域的引物
③LAMP法并不需要對雙鏈DNA進行預變性及進行溫度循環。
針對靶基因的六個不同的區域,基于靶基因3’ 端的F3c、F2c和Flc區以及5’ 端的Bl、B2和B3區等6個不同的位點設計4種引物。
LAMP反應的開始階段四條引物都被使用,但在循環階段則只有內引物被使用。
FIP(Forward Inner Primer):上游內部引物,由F2區和F1C區域組成,F2區與靶基因3’端的F2c區域互補,F1C區與靶基因5’端的Flc區域序列相同。
F3引物:上游外部引物(Forward Outer Primer),由F3區組成,并與靶基因的F3c區域互補。
BIP引物:下游內部引物(Backward Inner Primer ),由B1C和B2區域組成,B2區與靶基因3’端的B2c區域互補,B1C域與靶基因5’端的Blc區域序列相同。
B3引物:下游外部引物(Backward Outer Primer ),由B3區域組成,和靶基因的B3c區域互補。
環介導等溫擴增引物設計
環介導的等溫擴增技術原理
內引物FIP的F2與其模板的互補序列F2c結合,在Bst DNA聚合酶作用下,從F2的3’末端開始啟動DNA合成,合成一條以FIP為新的DNA單鏈并與模板鏈結合形成新的雙鏈DNA。
環介導等溫擴增過程演示
反應時間對LAMP的影響
環介導等溫擴增檢測
反應結束后對擴增產物的檢測常使用焦磷酸酶沉淀檢測(濁度檢測)、熒光檢測、凝膠電泳檢測等。 
焦磷酸酶沉淀的檢測(濁度檢測):在LAMP反應過程中,dNTP析出的焦磷酸根離子與反應溶液中的Mg2+結合,產生副產物焦磷酸酶白色沉淀,研究者發現LAMP反應中焦磷酸鎂沉淀的形成與所產生的DNA量之間的關系,發現兩者生成量之間呈線性關系,并且焦磷酸鎂沉淀在400 nm處有吸收峰,從而進行LAMP的定量檢測。 
熒光檢測:LAMP有極高的擴增效率,可在一小時內將靶序列擴增至109~l010倍,所以當反應液中加入核酸染料SYBR Green I后,在紫外燈或日光下通過肉眼即可進行判定,如果含有擴增產物,反應混合物變綠;反之,則保持SYBR Green I的橙色不變。
檢測流程圖
 

上一頁:建筑總平面圖的表達內容和繪制步驟ppt課件 下一頁:返回列表

環介導等溫擴增技術原理ppt課件

下載地址

環介導等溫擴增技術原理ppt課件

優秀PPT

Copyright:2009-2019 pptbz.com Corporation,All Rights Reserved PPT寶藏 版權所有

免責聲明:本網站內容由用戶自行上傳,如權利人發現存在誤傳其他作品情形,請及時與本站聯系

PPT模板下載 粵ICP備13028522號

碰超热视频在线