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親和層析原理和步驟ppt課件下載

素材編號:
419011
素材軟件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上傳:
yangyiner
上傳時間:
2020-07-04
素材大小:
4 MB
素材類別:
生物課件PPT
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親和層析原理和步驟ppt課件

親和層析原理和步驟ppt課件免費下載是由PPT寶藏(www.ichenwin.com)會員yangyiner上傳推薦的生物課件PPT, 更新時間為2020-07-04,素材編號419011。

這是親和層析原理和步驟ppt課件,包括了原理,常見具有專一性親和力的生物分子對,親和層析分離,特點,應用等內容,歡迎點擊下載。

親 和 層 析 Affinity Chromatography  
一、原理
親和層析是利用生物大分子所具有的專一親和力而設計的純化技術
尋找配基
配基固定化
制成親和層析柱
吸附
解吸
酶:             基質類似物,抑制劑,輔酶
抗體:           抗原,病毒,細胞
細胞:           細胞表面特異蛋白,外源凝集素
核酸:           互補堿基序列,組蛋白,核酸聚合酶
激素或藥物:     受體,載體蛋白
外源凝集素:     多糖,糖蛋白,細胞表面受體,細胞
(一) 載體的選擇
1、載體要求:
(1)不溶性
(2)滲透性:疏松網狀結構,有良好的液
             體流動性
(3)化學和機械性能穩定
(4)具備大量能被活化的基因
(5)抗微生物和酶的侵蝕
2、常用載體
(1)纖維素
 特點:價廉、來源充足
       纖維性、非均一性限制大分子的摻入
       非專一性吸附嚴重
       用于抗體和酶的純化
(3)瓊脂糖凝膠
濃度       商品
2%     Sepharose 2B    
4%     Sepharose 4B    
6%     Sepharose 6B    
(4)聚丙烯酰胺凝膠
(5)多孔玻璃
特點:不受微生物的侵蝕
      耐酸、堿、有機溶劑
      表面非專一性吸附
(二)配基的選擇
1、對于欲純化的物質應有專一親和力
2、必須具備能被修飾的功能基團
以酶和底物為例:
E+L                            EL
KL =[E][L]/[EL]=[E0-EL][L0-EL]/[EL]
E0、L0:起始濃度
當L0》E0時
KL =[E0-EL][L0]/[EL]
[EL]=[E0-EL][L0]/ KL
Kd=結合酶/游離酶=[EL]/[E0-EL]=[L0]/ KL
(三)固相化——將配體以共價鍵連接于固相基 質上制成固相化吸附劑
載體的排斥效應
載體的空間障礙
二、親和層析分離
1、裝柱和平衡
2、上樣、親和吸附
3、洗脫
已使用過和柱,經過再生處理,去除非特異吸附的雜質后,可重復使用
再生步驟:
起始緩沖液重復平衡一次
用高離子強度和低離子強度溶液處理
用弱酸或弱堿溶液處理
三、特點
1、一步純化步驟
2、產物非常純
3、可從很稀的溶液中純化到所需物質
4、可去除已變性或部分降解物質
四、應用
1、分離和純化
2、分辨化學或遺傳學上修飾的酶
3、純化親和標記的活化中心肽段和蛋白質
   結構研究
4、純化人工合成的多肽和蛋白質
5、解釋酶作用機理
 

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