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實驗室生物安全講座課件ppt

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這是實驗室生物安全講座課件ppt,包括了歷史上的實驗室感染事件,與致病微生物接觸就存在安全問題,實驗室生物安全概述,實驗室生物安全風險評估,實驗室生物安全水平,試題等內容,歡迎點擊下載。

實驗室生物安全
實驗室是人類認識自然、改造自然,利用自然界中與人類生產生活相關的物理、化學、生物、輻射等各種因素,經特殊實驗技術,按照科學的規律進行研究(實驗)活動的場所。近半個世紀以來,隨著實驗技術的不斷發展,人們已經認識到科研成果在造福人類的同時,同樣存在一定的危險,而實驗室正是對人類具有一定潛在高危險的工作場所。
實驗室安全管理應根據各種實驗室的專業特點及接觸的有害因子進行分類管理,采取不同的安全防護措施,但其與防火、防盜、防水等工作是一個共性的任務。
疾病預防控制機構實驗室的安全防護主要有:
放射(輻射)安全防護                               
化學物品安全防護
生物安全防護
                                               動物安全防護
歷史上的實驗室感染事件
1886年郭霍第一次報告了一例霍亂病的實驗室感染事件。
1951年美國統計的1342個實驗室感染病例,涉及69種不同的微生物。
1967德國馬爾堡病毒實驗室感染事件,37人感染,1/4死亡。
1979年4月,前蘇聯一實驗室發生泄露事故,泄露出的炭疽芽胞粉劑和爆炸釋放出的大量毒霧,造成附近1000多人發病,數百人死亡。
1993年美國CDC報告了17名實驗室人員因職業接觸感染HIV。
SARS冠狀病毒引起的實驗室感染事件:2003年臺灣一研究人員在BSL-4實驗室被感染;2003年新加坡一名博士后研究生在實驗室被感染;2004年北京一個國家級病毒病研究機構,一名安徽醫科大學研究生被感染。
與致病微生物接觸就存在安全問題
1974年丹麥某醫院臨床生化實驗室的工作人員體檢時發現肝炎發病率比普通人群高出7倍。
1976年英國某醫學實驗室的工作人員體檢時發現結核菌感染者比其他人群高5倍。
1978年英國報告一個商業洗衣房因清洗來自一Q熱實驗室的衣褲時發生6例雇員和1例參觀者感染。
據統計,從事病原微生物研究的工作人員發生實驗室感染的概率較普通人群高5~7倍。實驗室感染事件將不僅損害實驗室工作人員的健康,給所在單位和部門帶來不利影響,甚至可造成疾病的流行,危及廣大群眾的健康和生命安全,乃至妨礙社會經濟的發展以及和諧社會的建設,造成嚴重的后果。
為此,防止實驗室生物危害,保障公眾健康和安全,實驗室生物安全必須引起高度重視。
第一章  實驗室生物安全概述
第一節   實驗室生物安全的概念
一、生物危害( biological harm)
(一)概念
 廣義的生物危害
           是指各種生物因子對人、環境和社會造成的危害或潛在危害。
狹義的生物危害
           是指在實驗室進行感染性致病因子的科學研究過程中對實驗室人員造成的危害和對環境的污染。
(二)生物危害的來源
     1. 來源于人和動物的各種致病性微生物。
          如:  鼠疫;霍亂;SARS; 瘋牛病;禽流感。
     2. 來自外來生物的入侵。
         我國原來沒有的外來生物引起人,農作物,牲畜病 
        蟲害的致病因子, 如 美國白蛾。
     3. 來自轉基因生物可能的潛在危險。
        1998年研究發現老鼠食用轉基因土豆后免疫系統受
         到破壞,轉基因的生物安全評價成為人們日益關注
         的焦點。
     4. 來自生物恐怖事件。
        2001年9.11后美國炭疽桿菌引起的感染和死亡事件。
二、生物安全(biosafety)
(一)概念
1. 生物安全:是指防范、處理微生物及其毒素對人體危害的綜合措施。
2. 實驗室生物安全(Laboratory biosafety):
                                是指以實驗室為科研和工作場所時,避免危險生物因子             
                                造成實驗室人員暴露、向實驗室外擴散并導致危害的
                                 綜合措施。
                                即當實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微
                                生物及其毒素時,通過實驗室的設計建造(二級屏
                                障)、使用個體防護裝置(一級屏障)、嚴格遵從標
                                 準化的工作及操作程序等綜合措施:
                                  (1)確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染。
                                  (2)確保周圍環境不受其污染。
(二)生物安全的相關術語
1. 有害生物因子( biohazardous agents ) : 是指那些能夠對人、環境和社會造成危害作用的生物因子,如病原微生物、來自高等動植物的毒素和過敏原、來自微生物代謝產物的毒素和過敏原、基因結構生物體等。
  2. 危害廢棄物( hazardous waste ) :
    具有潛在生物危險、可燃、易燃、腐蝕、有毒、放射和起破壞作用的對人、環境有害的一切廢棄物。
3. 氣溶膠 (aerosol)
   懸浮于氣體介質中的固態或液態微小粒子形成的相對穩定的分散體系(粒徑一般為 0.001-10μm) 。
微生物氣溶膠(microbial aerosol):微粒中含有微生物。
 感染性氣溶膠(infectious aerosol):微粒中含有致病微生物。
 飛沫 (droplet):由于動物打噴嚏、咳嗽和鳴叫等產生的以唾 
                         液、粘液和微生物等為主要成分的氣溶膠。
飛沫核(deoplet core):當飛沫中的水分蒸發后剩余的粘液蛋白
                                     和微生物等。
     飛沫有90%以上的直徑小于5μm,飛沫核的直徑一般為1~2μm,均能長期飄浮在空氣中,是引起動物疾病傳播的重要途徑。
4. 緩沖間( buffer room )
     設置在清潔區、半污染區和污染區相臨兩區之間的緩沖密閉室,具有通風系統,其兩個門具有互鎖功能,且不能同時處于開啟狀態。
 5. 生物安全柜(biological safety cabinet, BSC)
     是生物安全實驗室中極為重要的設備,其主要原理是使安全柜內保持負壓,氣流只能從外部進入安全柜,使柜內的病原微生物不能溢出,從而保護工作人員;同時其循環風和排風經過高效過濾器過濾,又能保護環境。
6. 個人防護裝備(personal  protective  equipment,  PPE)
   人們在實驗室進行科研活動過程中,為防御各種有害因子而穿戴和配備的各種用品的總稱。
第二節  實驗室感染的類型和來源
一、實驗室感染的類型
有三種類型:
1.氣溶膠導致的實驗室感染-------由于實驗室中的病原微生物可以以氣溶膠的形式飄散在空氣中,工作人員吸入了這種污染的空氣而造成感染。
2.事故性感染------因為實驗室人員操作過程中的疏忽,使本來接觸不到的病原微生物污染環境,直接或間接感染實驗室人員甚至危及周圍環境。
3.人為破壞------有意播散生物制劑。
二、實驗室感染的來源
(一)標本
   1. 檢測標本:實驗室標本;臨床標本。
    2.  菌毒種:一類;二類;三類;四類。
(二)儀器設備使用過程中產生的污染
   1.離心機:可能造成實驗室感染的有氣溶膠、飛濺物和
                         離心管泄漏等。
   2.組織勻漿器、粉碎器及研磨器:可能造成實驗室感染的
                         有氣溶膠、漏和容器破碎等。
   3.超聲波器具:氣溶膠。
4.真空冷凍干燥機及離心濃縮機:
                           氣溶膠;直接接觸污染。
5.培養攪拌器、振蕩器和混勻器:
                            氣溶膠;飛濺物;溢出物。
6.恒溫水浴器和恒溫震蕩水浴器:微生物生成;氣溶膠
7.厭氧罐: 爆裂,散布傳染性物質。
8.干燥罐: 內爆,散布傳染性物質。
9.冷凍切片機: 飛濺物。
(三)操作過程產生的污染
1. 接種:氣溶膠。應使用無彈力的鉑絲接種環,細菌接種
      后接種環火焰滅菌易崩散,酒精燈燒灼時要特別注意。
2. 混勻:氣溶膠。吸管吸吹菌液時不要產生氣泡,應沿容
              器壁排出。
3. 研磨:氣溶膠。最好使用組織研磨器,乳缽易產生氣溶
               膠。
4. 移液:吸管上端的棉花松緊要適度,吸液時要從管底吸
               取,吹出時要輕緩,不要全部吹凈,以免產生氣
               泡,形成氣溶膠。
5. 開封:溢出。 要避免壓力和氣流的急劇變化。
6. 離心:離心管套底墊要完好,使用匹配的管、套、離心
               頭,加蓋。
7. 注射:做好個人防護,正確使用注射器。
8. 搬運:室內移動要避免滑落,移出室外要有堅實密閉的
               外包裝。
(四)實驗動物
        接種于實驗動物體內的病原微生物,可通過呼吸、糞便等途徑排出體外。污染室內環境。試驗人員防護或操作不當可造成感染。
第三節  實驗室生物安全防護
實驗室生物安全防護:
     為了避免實驗室中有害的或有潛在危害的生物因子對人、環境和社會造成危害和潛在危害而采取防護措施和管理措施。
     硬件:實驗室設計建造、設備的配置和使用個人防護
                裝備。
     軟件:標準化的操作規程和嚴格的管理規程。
生物安全防護的目的:
    當研究各種對人或動物有致病或生命危險的病原微生物或有害生物因子時,將可能產生的危險降到最低,最大限度的保護人類健康和生態環境。
一、實驗室防護-----硬件
(一) 一級屏障( primary barrier )
      是操作者和被操作對象之間的隔離,以防止操作人員被感
      染為目的,也稱一級隔離 。
      如: 安全設備---生物安全柜
             個體防護裝備---防護服;手套;安全眼鏡;呼吸防護
              裝置;緊急沖洗裝置;鞋套等。
(二) 二級屏障( secondary barrier )
     是生物安全實驗室和外部環境的隔離,也稱二級隔離。是一級屏障的外圍設施。以防止實驗室以外的人員被感染為目的。
     如:實驗室的建筑、結構和裝修、電氣和自控、通風和凈化、給水排水和氣體供應、消防和滅菌等。
二、規范化實驗室管理-----軟件
   生物安全實驗室相關制度及標準化的操作規程的建立。
  (一) 實驗室管理規章制度:包括培訓制度、準入制
         度、健康監測報告制度、個人良好行為制度、
         意外事故報告制度等。
   (二) 標準操作程序:包括實驗廢棄物處置標準操
          作程序、進出實驗室標準程序、菌毒種使用
          標準操作程序、實驗室消毒標準操作程序、
          意外事故處理標準操作程序及各種儀器設備
          和實驗標準操作程序等。
第四節  生物安全法規
一、國際組織和國外病原微生物實驗室生物
         安全相關法規和指南
1.《實驗室生物安全手冊》(WHO)
  1988年第一版,1993第二版,2004年第三版
2.《微生物危險等級的分類》(歐洲經濟共同體 EEC)
   指令93/88
3.《微生物和生物醫學實驗室生物安全手冊》 (美國)
  1983年第一版,1993年第三版,1999年第四版;
4.《生物危害主要防護:生物安全柜的選擇、安裝和使用》 (美國)2000年第二版;
5.《實驗室生物安全指南》(加拿大)
  1990年第一版,1996年第二版,2004年第三版
二、我國病原微生物實驗室生物安全相關法規和標準
1. 《中華人民共和國傳染病防治法》
(2004年8月28日通過修訂版, 2004年12月1日起施行 )
2.《病原微生物實驗室生物安全管理條例》
國務院424號令(2004年11月5日通過,2004年11月12日實施)
3.《醫療廢物管理條例》
  (2003年6月4日國務院第十次常務會議通過,2003年6月16日公布實行)
4.《中國醫學微生物菌種保藏管理辦法》
    (1985年3月23日衛生部)
5. GB 19489-2004《實驗室-生物安全通用要求》
       2004年10月1日施行。
6. WS 233-2002《微生物和生物醫學實驗室-生物安全通用準則》
       2002年12月03日發布 2003年08月01日實施
7. GB 50346-2004《生物安全實驗室建設技術規范》
       2004年08月03日發布 2004年09月01日實施
衛生部頒布的配套文件
1.《人間傳染的高致病性病原微生物實驗室和實驗活動生物安全審批管理辦法》
衛生部第50號令,2006年7月10日發布施行
2.《可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運輸管理規定》
衛生部第45號令,2005年11月24日發布 2006年2月1日起施行  
3.《人間傳染的病原微生物名錄》
衛科教發[2006]15號衛生部
國務院生物安全管理條例
《條例》共7章,依次為:1、總則;2、病原微生物的分類和管理;3、實驗室的設立與管理;4、實驗室感染控制;5、監督管理;6、法律責任;7、附則。共72條。
  目的:加強實驗室生物安全管理,保護實驗室工作人
            員和公眾的健康。
適用范圍:境內的實驗室及其從事的實驗活動的生物安
            全。實驗活動:指實驗室從事與病原微生物菌
          (毒)種、樣本有關的研究、教學、檢測、診斷
            等活動。
《條例》規定:國家對病原微生物實行分類管理。根據其傳染性、感染后對個體或群體的危害程度,將病原微生物分為一~四類,其中一、二類統稱為高致病病原微生物。
《條例》規定對實驗室實施分級管理,按防護水平和國家標準的規定,將實驗室分為一至四級。對三級、四級實驗室實行強制認可。
第二章
實驗室生物安全風險評估
所有生物實驗室進行生物實驗研究必須進行生物安全評估。
實驗室生物安全評估可幫助實驗操作者正確選擇生物安全水平(設施、設備和操作),評估職業性疾病風險、制定相應的操作規程和管理規程,采用相應安全防護措施,減少危險性事件的發生。
第一節   病原微生物的風險評估
一、病原微生物的風險等級
        中國的病原微生物危害程度分類(2006年我國衛生部制定的 《人間傳染的病原微生物名錄》):
第一類病原微生物:
     能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物,以及我國尚未發現或者已經宣布消滅的微生物。
          如: 鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌;天花病毒、新疆出血熱病毒、
               埃博拉病毒、猴痘病毒等29種病原體 。
第二類病原微生物:
      能夠引起人類或者動物嚴重疾病,比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。
          如:炭疽桿菌、布氏桿菌、結核分枝桿菌、艾滋病病毒、高致
                病性禽流感病毒、乙型腦炎病毒、脊髓灰質炎病毒、狂犬
                 病毒、SARS冠狀病毒、西尼羅病毒等 70 種。
     第一類、第二類病原微生物統稱為高致病性病原微生物。
第三類病原微生物:
     能夠引起人類或者動物疾病,但一般情況下對人、動物或者環境不構成嚴重危害,傳播風險有限,實驗室感染后很少引起嚴重疾病,并且具備有效治療和預防措施的微生物。
     如: 沙眼衣原體、破傷風梭菌 致病性大腸桿菌、腦膜炎球菌、傷 
           寒沙門菌、志賀菌、葡萄球菌;鉤端螺旋體;白假絲酵母菌;
           腸道病毒、輪狀病毒、肝炎病毒、風疹病毒、流感病毒、皰疹 
           病毒 等 275 種。
第四類病原微生物:
     在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。
      如: 小鼠白血病病毒;減毒、弱毒菌株,以及不屬于以上三類的各種
             低致病性微生物菌種。
第二節 實驗室活動的風險評估
實驗室活動的風險評估是在實驗室活動中可能涉及的傳染或潛在傳染因子等其他因素的基礎上,結合產生危險的實驗操作而進行的綜合評價。
實驗室內的多種情況都可以造成實驗室工作人員感染和實驗室環境污染。
   如:對病原體的操作達不到相應的生物安全操
          作水平,缺乏嚴格消毒、隔離等保護措施;
           對操作過程中產生的微小飛濺、氣泡、爆
           破性氣溶膠等沒有防止逃逸的設備和措施
           等。
 實驗操作涉及:
           1.含有已知感染性病原體的物質。
           2.含有未知感染性病原體的物質。
           3.可能含有未知感染性病原體的物質。
           4.含有重組DNA分子的物質。
           5.動物研究。
第三節 實驗室儀器設備相關的危險與風險評估
實驗儀器設備是微生物學試驗是必不可少的技術裝備,在使用中亦有不同程度的感染性生物因子污染的風險,若使用不當也將造成生物危害。尤其是實驗室常用儀器,由于與感染性生物因子接觸機會較大,更應當注意安全使用規范。
實驗室儀器設備的風險評估應從以下各方面進行:
1.所有儀器設備是否都經過安全使用認證。
   2.在對儀器設備進行維護之前,是否進行了清除污染工作。
   3.生物安全柜和通風櫥是否進行定期檢測和保養。
   4.高壓滅菌器和其他壓力容器是否定期檢查。
   5.離心機的離心吊桶及轉子是否定期檢查。
   6.是否有盛放碎玻璃的安全容器。
   7.是否配備并使用供丟棄銳器的容器。
   8.是否配備并使用污染廢棄物專用容器。
第四節  實驗室生物安全的 環境評估
微生物學實驗室中存在不同程度的感染性生物因子的風險,良好的實驗室環境是保證生物因子污染最小化的必要條件。
實驗室生物安全環境評估因素涉及:
    1.實驗室建筑
    2.儲存設施
    3.環境衛生和工作人員設施
    4.實驗室生物安全保障
    5.暖氣和通風
    6.照明
第三章
 實驗室生物安全水平
一.實驗室生物安全的分級
 根據所操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施,將實驗室生物安全防護水平(biosafety level,BSL)分為4級,1級防護水平最低,4級防護水平最高。
 分別 以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示實驗室的相應
              生物安全防護水平。
            以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示動物實驗
            室的相應生物安全防護水平。
一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。
P1,P2,P3,P4級實驗室---實驗室的物理封閉水平。
     為美國國立衛生研究院(NIH)的分級標準。
現美國疾病預防控制中心(CDC)和國際社會許多國
     家則采用BSL名稱----生物安全水平。
                 P1------ BSL-1
                 P2------ BSL-2
                 P3------ BSL-3
                 P4------ BSL-4
二、生物安全實驗室分級 
            ----與病原微生物危害程度分類相對應
一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。
三、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動,要通過國家認可,頒發相應級別的生物安全實驗室證書,證書有效期為5年。
生物安全實驗室的分級
(一)基礎實驗室
1. 一級生物安全實驗室(P1/BSL-1):
一級生物安全水平:能夠安全操作,對實驗室工作人員和動物無
                                     明顯致病性的、對環境危害程度微小的、特
                                     性清楚的病原微生物的生物安全水平。
用途:   (1) 教學用的微生物學實驗室等。
                (2)從事具有明確生物學特征的、已知在健康成人中不引起
                     疾病的活的微生物菌(毒)株的研究;
安全裝備:
               (1) 一般不需要生物安全柜;
               (2) 工作人員在實驗室應穿工作服,
               (3)必要時戴手套或眼罩;
               (4)配備常規的實驗及清潔用具;
實驗室設施要求:
實驗室應設洗手池(靠近出口處)。
實驗室設計易于清潔。實驗臺面不透水,耐腐蝕、耐熱。
實驗室窗戶應設置紗窗。
有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)。
接觸微生物或含有微生物的物品后,脫掉手套后和離開實驗室前要洗手。
禁止在工作區飲食、處理隱形眼鏡、化妝及存儲食物。
制定尖銳器具的安全操作規程。
按照實驗室安全規程操作,降低濺出和氣溶膠的產生。
每天至少消毒一次工作臺面,活性物質濺出后要隨時消毒。
所有培養物、廢棄物在運出實驗室前須進行滅活(如高壓),需運出實驗室滅活的物品必須放在專用密閉容器內。
2.二級生物安全實驗室(P2/ BSL-2)
二級生物安全水平:能夠安全操作對實驗室工作人員和動物致       
                                     病性低的、對環境有輕微危害的病原微生物
                                     的生物安全水平。
用途: 臨床、診斷、教學,實驗室里所有的中等風險因子,存在
                 于人群并與某些嚴重性人類疾病有關,但具有有效的治療
                 和預防措施。
安全裝備:
          (1) 生物安全柜(II級);
          (2) 實驗外罩、手套等在離開時必須留在實驗室中;不能污染非
               實驗區。
          (3) 在生物安全柜(II級)外操作感染性物質,要使用個體防護
            (手套,口罩或眼罩);
          (4) 實驗室提供帶鎖的門,以及相應的實驗清潔設備。
實驗室設施要求:
     滿足一級實驗室 (標準微生物操作規程) 各款要求外,還應該滿足以下要求:
           (1) 消毒設施(高壓滅菌鍋、化學消毒裝置等)
           (2) 洗眼裝置
           (3)可自動關閉的門鎖
           (4)門口有發光指示裝置
實驗室入口貼上生物危險標志。
制定實驗室特定的生物安全操作規則,培訓制度。
工作人員應接受必要的免疫接種和檢測 (如乙型肝炎疫苗,卡介苗等)
實驗設備在運出修理或維護前必須進行消毒。
人員暴露于感染性物質時,及時向實驗室負責人匯報,并記錄事故經過和處理方案。
禁止將無關動物帶入實驗室。
緊急處理措施
皮膚針刺傷或切割傷:立即用肥皂和大量流水沖洗,盡可能擠出損傷處的血液,用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。
皮膚污染:用水和肥皂沖洗污染部位,并用適當的消毒劑浸泡,如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。                                                                                                                                                                                                                                                                                                                          
粘膜污染:用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。
衣物污染:盡快脫掉污染的衣物,進行消毒處理。
污染物潑濺:
發生小范圍污染物潑濺事故時,應立即進行消毒處理。
發生大范圍污染物潑濺事故時,應立即通知實驗室主管領導和安全負責人到達事故現場查清情況,確定消毒的程序
(二)防護實驗室 
   三級生物安全實驗室(P3/ BSL-3):
   從事高致病性病原微生物實驗活動,要通過國家認可和審批。
三級生物安全水平:能夠安全的從事國內和國外的、可能通過呼
                                     吸道感染、引起嚴重或致死性疾病的病原微
                                     生物工作的生物安全水平。
實驗室設施要求:
          (1)安全裝備:防護服---前面不開口或裹身的罩衣。
                                     個人防護裝備----呼吸器、面罩。
          (2)實驗室設施:實驗室由清潔區、半污染區和污染區組
                                       成,污染區和半污染區之間設緩沖間。必要
                                       時半污染區和清潔區之間亦設緩沖間。
                                      建造空氣管道通風系統以進行氣體消毒。
                                       生物安全柜(II級)
(三)高級防護實驗室
    四級生物安全實驗室(P4-- BSL-4):
     從事高致病性病原微生物實驗活動,要通過國家認可和審批。
 四級生物安全水平: 能夠安全的從事國內和國外的、能通過氣溶膠傳播,實驗室感染高度危險,嚴重危害人和動物生命和環境的、沒有特效治療和預防方法的微生物工作的生物安全水平。
實驗室設施要求:
(1)安全裝備: 生物安全柜(III級)。III級生物安全柜中排出的氣
                            體在排到室外前須經兩個高效空氣過濾器過濾。
            個人防護裝備――防護服,呼吸器、正壓面罩;進入或離開
                               實驗室必須要通過更衣和淋浴室。
      (2)實驗室設施:實驗室應為負壓。由清潔區、半污染區和污
                                     染區組成。
進入控制:獨立于建筑內,或劃出明顯區域。
實驗過程中產生的污水必須經過凈化消毒后才能排往下水道。
必須要有供標本、試驗用品以及動物進入的氣鎖室。配備應急電源和專用供電線路。安裝安全防護排水管。
 

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