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瓊脂糖凝膠電泳詳細過程與步驟ppt課件下載

素材編號:
419051
素材軟件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上傳:
yangyiner
上傳時間:
2020-07-04
素材大小:
4 MB
素材類別:
生物課件PPT
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瓊脂糖凝膠電泳詳細過程與步驟ppt課件

瓊脂糖凝膠電泳詳細過程與步驟ppt課件免費下載是由PPT寶藏(www.ichenwin.com)會員yangyiner上傳推薦的生物課件PPT, 更新時間為2020-07-04,素材編號419051。

這是瓊脂糖凝膠電泳詳細過程與步驟ppt課件,包括了實驗目的,實驗原理,實驗材料、器具及藥品,DNA的遷移速率決定因素,不同類型瓊脂糖分離DNA片段的范圍,瓊脂糖凝膠中DNA的檢測,使用EB染色注意事項,凝膠中DNA的成像等內容,歡迎點擊下載。

瓊脂糖凝膠電泳 Agarose gel electrophoresis
瓊脂糖(agarose)
半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷
核酸凝膠電泳是分子克隆核心技術之一,用于分離、鑒定和純化DNA或RNA片段
缺點
1. 機械強度差,易破碎,濃度不能太低。
2. 易被細菌污染,不易保存,臨用前配制。
3. 瓊脂糖支持層上的區帶易于擴散,電泳后必須立即固定染色。
4. 與PAGE相比,分子篩作用小,區帶少。
1、DNA分子的大小
  雙鏈DNA分子遷移的速率與其堿基對數的常用對數近似成反比;
  2、瓊脂糖濃度
  濃度越低,相同核酸分子遷移越快;
  3、DNA的構象  
  同一分子:超螺旋環狀>線狀>切口環狀
4、凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠
  溴化乙錠(EB)插入雙鏈DNA造成其負電荷減少、剛性和長度增加。
5、所用的電壓
  低電壓時DNA片段遷移率與所用的電壓成正比。
6、瓊脂糖種類
  常見的有兩種:標準瓊脂糖和低熔點瓊脂糖;
   不同類型瓊脂糖的性質
不同類型瓊脂糖分離DNA片段的范圍
TAE和TBE電泳緩沖液比較
凝膠載樣緩沖液
6×凝膠載樣緩沖液
瓊脂糖凝膠中DNA的檢測
使用EB染色注意事項
(1)EB被認為是一種強致癌物質
(2)EB可用來檢測單鏈或雙鏈核酸
(3)EB使用時的配制、貯存及使用
    EB常用水配制成10 mg/ml的貯存液,于室溫保存在棕色瓶或用鋁箔包裹的瓶中,使用終濃度為0.5 μg/ml 。
(4)當要知道DNA片段準確大小時,凝膠應在無EB情況下電泳,電泳結束后再用EB染色。
凝膠中DNA的成像
關于瓊脂糖凝膠電泳的實驗技巧和方法\幾點注意事項
1)加樣時槍頭不要碰壞凝膠壁,否則DNA的帶型將不會整齊,加樣前要用槍頭吸打凝膠孔中的溶液,以趕走樣品空中的氣泡。
2)每孔最大DNA上樣量決定于DNA樣品片段的大小、數目及樣品孔形狀與容量。
3)應注意每孔最大上樣容量及樣品孔體積,以免加樣時樣品流入附近樣品孔造成交叉污染,影響結果分析。
4)在實驗加樣中不一定每一個樣品都換一個槍頭,可在陽極槽中反復吸打電泳緩沖液以清洗。(對于Southern印跡轉移和需要回收DNA片段的電泳,則應該每一個樣品用一個槍頭加樣,避免樣品交叉污染。)
5)凝膠中加入EB進行電泳,便于紫外線下觀察電泳狀態,但EB會導致線形DNA遷移率下降,這在酶切質粒與空白對照質粒一起電泳時應值得注意。
6)電泳過程中,溴化乙錠向負極移動,與DNA泳動的方向相反,較長時間的電泳會造成靠正極方向的凝膠中溴化乙錠含量低,會對含量較少的小分子DNA片段檢測困難。處理方法是:將凝膠在0.5ug/ml的EB溶液中染色30-45分鐘。
7)判斷正負極的另一方法是負極氣泡(H2)比正極氣泡(O2)多一倍。
 

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